发明专利“一种猪精液的冷冻保存方法”进入实质审查阶段

专利类型：发明公开

申请(专利)号：CN202210259827.9申请日：2022-03-16

申请公布号：CN114586771A公开公告日：2022-06-07

申请人：上海市农业科学院; 上海祥欣畜禽有限公司

地址：201106 上海市闵行区北翟路2901号

发明人：张树山; 张德福; 戴建军; 吴彩凤; 孙玲伟; 徐皆欢; 韩雪峻; 李步社; 姜红菊

主权项：

1.一种猪精液的冷冻保存方法,其特征在于,包括如下步骤：(1)配制冷冻基础液TCG,往冷冻基础液中加入20～25％的卵黄,搅拌均匀后,得到冷冻稀释Ⅰ液,往冷冻稀释Ⅰ液中加入6％的甘油和0.4～0.6％的OEP,搅拌均匀后,得到冷冻稀释Ⅱ液；(2)将稀释液BTS、冷冻稀释Ⅰ液和冷冻稀释Ⅱ液分别置于密闭容器中,通入氢气进行加氢处理,得到加氢处理后的稀释液BTS、冷冻稀释Ⅰ液和冷冻稀释Ⅱ液；(3)采精,将猪精液用加氢处理后的稀释液BTS等温1∶1稀释,得到预稀释后的精液；(4)将预稀释后的精液在17℃下平衡2～4h,然后离心,去除上清后,将精子沉淀用等温的、加氢处理后的冷冻稀释Ⅰ液稀释,稀释至精子密度为20×10～8个/mL,然后降温平衡至4℃,最后用等温的、加氢处理后的冷冻稀释Ⅱ液1∶1稀释,得到稀释后的精液；(5)将稀释后的精液用冷冻细管分装并封口,然后置于程序冷冻仪的箱体中进行冷冻,冷冻结束后,将冷冻细管移至液氮中保存；步骤(1)中,所述冷冻基础液TCG的制备方法为：称取葡萄糖1.1g、柠檬酸1.48g、Tris2.42g、青霉素钠0.06g和硫酸链霉素0.1g,溶于到双蒸水中,搅拌溶解后,定容至100mL；步骤(2)中,所述稀释液BTS的制备方法为：称取葡萄糖3.7g、二水柠檬酸三钠0.6g、EDTA0.125 g、碳酸氢钠0.125g、氯化钾0.075g、青霉素钠0.06g和硫酸链霉素0.1g,溶于双蒸水中,然后定容至100mL,调pH至7.2,渗透压为310mosm/L。

摘要：

本发明涉及一种猪精液的冷冻保存方法,首先制备冷冻稀释Ⅰ液、冷冻稀释Ⅱ液和稀释液BTS,接着对三种溶液进行加氢处理,采精后,将猪精液用加氢处理后的稀释液BTS等温1∶1稀释,然后在17℃下平衡2-4h,离心去除上清,将精子沉淀用等温的加氢处理后的冷冻稀释Ⅰ液稀释,然后再降温平衡至4℃,最后用等温的加氢处理后的冷冻稀释Ⅱ液1∶1稀释,将稀释后的精液用冷冻细管分装并封口,再置于程序冷冻仪的箱体中进行冷冻,冷冻结束后,将冷冻细管移至液氮中保存。该方法操作简单,可有效提高猪冻精的解冻活力和精子顶体完整率,并能降低精子氧化损伤程度,克服了精子在较长的降温平衡过程中容易遭受氧化损伤的问题。