发明专利“一种猪精液的冷冻保存方法”进入实质审查阶段

专利类型：发明公开

申请(专利)号：CN202210075199.9申请日：2022-01-22

申请公布号：CN114375946A公开公告日：2022-04-22

申请人：上海市农业科学院

地址：201106 上海市闵行区北翟路2901号

发明人：何孟纤; 孙玲伟; 戴建军; 张德福; 吴彩凤; 徐皆欢; 张树山

主权项：

1.一种鸡精液的冷冻保存方法,其特征在于,包括以下步骤；步骤1：稀释液的配置：基础稀释液为：谷氨酸钠1.92g、果糖1g、醋酸钠0.815g、柠檬酸钾0.128g、氯化镁0.068g,双蒸水定容至100mL,调节渗透压至333mOsm/Kg,pH至7.0；卵黄上清制备方法：取鸡蛋卵黄50mL,加入等体积生理盐水,4℃磁力搅拌器搅拌1h至两者完全融合；4℃,10000g离心45min,离心两次,取上清液装入15mL离心管中,制备成卵黄上清液,将其置于4℃条件下保存备用；步骤2：精液的稀释与平衡：采用两步法稀释精液,首先将镜检合格精液混合,测量体积后按照实验分组分为若干等分,在按照1:2的稀释比例加入等温预热的步骤1得到的基础稀释液,用10层纱布包裹,避光放入4℃冰箱中平衡1h,再1:1加入4℃预冷的基础稀释液,继续平衡10min后装管冷冻；步骤3：精液冷冻；将经步骤2中稀释后的精液用罐装机装入0.50mL细管,封口完成后放入程序冷冻仪内进行冷冻,设定程序为：5℃～-35℃时降温速率为7℃/min,从-35℃到-120℃时降温速率为9℃/min进行冷冻,待冷冻结束后迅速投入到液氮中保存；步骤4：精液解冻；将装有精液的0.5mL细管从液氮中取出,迅速置于37℃水浴锅中30s水浴解冻,解冻后用对应的37℃基础稀释液1:1稀释,孵育10min后进行各项精液指标检测。

摘要：

本发明公开了一种鸡精液的冷冻保存方法,包括以下步骤；步骤1：稀释液的配置：步骤2：精液的稀释与平衡：步骤3：精液冷冻；步骤4：精液解冻；本发明的鸡精液冷冻保存稀释液以人工授精中的精液保存问题为出发点,以果糖-醋酸钠-柠檬酸钾为基础成分稀释液配方,在基础稀释液中添加卵黄上清液,研制出能高效冷冻保存的稀释液配方。具有操作简单和冷冻效率高的特点。